可以根据其其近缘种的保守基因序列设计，但通常都很难得到全长。要得到基因全长，可先得到中间片段序列，然后RACE或者Inverse PCR都可以尝试下。如果近缘种序列同源性很高，还可以参考其他物种序列，设计几对引物，直接扩增基因全长。
PCR引物是利用碱基互补原则，通过找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。2，首先要找到你用来设计引物的目的基因全序列，一般NCBI、Genebank上都能找得到。
pcr扩增中，如何设计引物？引物5撇端可以修饰。引物3撇端不可修饰。引物3撇端要避开密码子的第3位。引物设计需要注意的地方很多，在大多数情况下，我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的。设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。
1、VOLAB专业可共用建筑物，但应自成一区，宜设在一端或一侧，与建筑物其他部分可相通。宜将实验室划分为三区，即污染区、半污染区和清洁区（建筑面积以不小于40平方米为宜）。实验区应设洗手池，宜采用非手动水龙头；在靠近出口处也应设洗手池。
2、不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密相连，需安装物品传递窗。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区，扩增前区与扩增后区应严格分开。
3、严格的操作规程：PCR实验室应制定严格的操作规程，包括实验前准备、实验操作步骤、实验后处理等环节的操作规程，以确保实验结果的准确性和可靠性。 合理的空间规划：PCR实验室需要有足够的空间来容纳PCR仪器、试剂、样品和实验人员。实验室应具备合理的布局，确保各个区域之间的流动性和操作的顺利进行。
4、pcr实验室没有太严格等洁净度要求，可根据多方面因素全面考虑。基本功能介绍：准备区、实验所需试剂的准备工作，分装等，由传递窗运送至制备区，严谨走人员通道。制备区、主要进行样品等保存，rna\dna的提取、贮存和其加入至扩增反应管和测定rna\dna的合成。
5、在施工中，应考虑危险化学品、毒物、放射性物品等的安全控制，不能影响实验中自然的生态系统。施工过程中，需要对物耗、成本、质量、工期等进行严格控制，保障建设进程正常完成。验收标准 实验室建成后，必须进行验收，以判断实验室装修是否符合规定标准。
6、包括实验记录、设备使用记录、消毒记录等。这些记录应及时、准确、完整地填写，并妥善保存备查。总之，基因扩增实验室的建设需要满足一系列的要求，以确保实验室的安全性、准确性和可靠性。同时，实验室工作人员也应具备相应的知识和技能，遵守实验室的规章制度，确保实验的顺利进行。
退火温度越低，引物和底物越容易结合，错配情况增多，造成PCR特异性降低，产物混入预期外片段。
退火温度过低会造成pcr时非特异性带增多，如果退火温度低都pcr不出结果，我觉得可能你的体系有问题，或者引物有问题，pcr温度低只是带比较多，一定会包含目的带的。 chlodiyi | 发布于2009-09-20 举报| 评论 0 0 为什么用48℃退火呢？还有你的引物退火温度71℃？你记错了吧？你把退火温度升到55℃。
非特异带是pcr中扩增出的非目的带。退火是指温度下降，单链DNA与引物结合的过程。温度过低，可造成引物与模板之间只需有一小段可以互补配对就能配对，造成非特异性产物增加。而温度高时，需要引物与模版之间有较长的互补配对序列才能相互配对，特异性增强。
影响：以文献作参考，在一定的温度范围内，退火温度越高，扩增的特异性也就越高。退火温度越低，扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高，引物与模板结合差，电泳条带差，甚至没有扩增。如果温度过低，扩增特异性差，杂带较多，背景深。
